一、肺炎感染模型構(gòu)建選擇依據(jù)

1. 病原體類型

• 細(xì)菌：肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）

• 病毒：流感病毒（H1N1）、SARS-CoV-2（需hACE2轉(zhuǎn)基因小鼠）

• 真菌：煙曲霉（Aspergillus fumigatus）

2. 研究目標(biāo)

• 急性感染（3-7天） vs 慢性感染（2-4周）

• 局部肺炎 vs 全身性播散

肺炎感染模型構(gòu)建:

二、細(xì)菌性肺炎模型（以肺炎鏈球菌為例）

1. 材料準(zhǔn)備

• 菌株：臨床分離株或ATCC標(biāo)準(zhǔn)株（如ATCC 6303）

• 動(dòng)物：C57BL/6或BALB/c小鼠（6-8周齡）

• 培養(yǎng)基：血瓊脂平板、Todd-Hewitt肉湯

2. 操作步驟

1. 細(xì)菌培養(yǎng)：

• 接種菌株至血瓊脂平板，37℃ 5% CO?培養(yǎng)16-18小時(shí)。

• 挑取單菌落接種至Todd-Hewitt肉湯，震蕩培養(yǎng)至OD600=0.5（約1×10^8 CFU/mL）。

2. 感染前處理：

• 離心收集細(xì)菌，PBS洗滌2次，重懸于無(wú)菌PBS（濃度根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整，通常1×10^6-10^7 CFU/50 μL）。

3. 氣管內(nèi)滴注感染：

• 麻醉小鼠（異fu烷），垂直固定，用套管針插入氣管，緩慢注入50 μL菌液。

• 立即旋轉(zhuǎn)小鼠使菌液均勻分布。

3. 關(guān)鍵參數(shù)

• 劑量：1×10^6 CFU/小鼠（致死率約50%）

• 觀察時(shí)間點(diǎn)：24h（早期炎癥）、72h（峰值期）、7天（恢復(fù)期）

三、病毒性肺炎模型（以流感病毒H1N1為例）

1. 材料準(zhǔn)備

• 病毒株：A/Puerto Rico/8/34 (PR8)

• 動(dòng)物：野生型C57BL/6小鼠

• 細(xì)胞：MDCK細(xì)胞（病毒擴(kuò)增用）

2. 操作步驟

1. 病毒擴(kuò)增與滴定：

• 接種病毒至MDCK細(xì)胞，48h后收集上清，測(cè)定TCID50（50%組織培養(yǎng)感染劑量）。

2. 鼻內(nèi)接種：

• 麻醉小鼠，仰臥位固定，用微量移液器滴注50 μL病毒液（1×10^3 TCID50）于鼻腔。

• 保持小鼠仰臥1分鐘確保吸入。

3. 關(guān)鍵參數(shù)

• 劑量：1×10^3 TCID50（導(dǎo)致體重下降15-20%）

• 觀察指標(biāo)：

• 每日體重變化（下降≥20%需安樂si）

• 肺組織病毒載量（qPCR檢測(cè)NP基因）

四、真菌性肺炎模型（以煙曲霉為例）

1. 材料準(zhǔn)備

• 菌株：煙曲霉臨床分離株（分生孢子濃度≥1×10^8/mL）

• 動(dòng)物：免疫抑制小鼠（環(huán)lin酰胺150 mg/kg預(yù)處理）

2. 操作步驟

1. 孢子制備：

• 培養(yǎng)真菌于PDA平板，25℃ 5天，用0.05% Tween-80 PBS收集孢子，過(guò)濾去除菌絲。

2. 氣管內(nèi)接種：

• 麻醉后注入50 μL孢子懸液（1×10^5-10^6孢子/小鼠）。

3. 關(guān)鍵參數(shù)

• 免疫抑制：環(huán)lin酰胺預(yù)處理72h后再感染

• 病理特征：Grocott染色觀察肺組織菌絲侵襲

五、表型驗(yàn)證方法

六、注意事項(xiàng)

1. 生物安全：

• 病毒操作需在BSL-2實(shí)驗(yàn)室，SARS-CoV-2需BSL-3。

2. 劑量?jī)?yōu)化：

• 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定LD50（細(xì)菌）或ID50（病毒），避免過(guò)度致死。

3. 感染均一性：

• 氣管滴注時(shí)確保小鼠呼吸平穩(wěn)，避免誤入食管。

4. 模型局限性：

• 小鼠與人類肺部解剖差異（如無(wú)咳嗽反射），需謹(jǐn)慎解讀結(jié)果